असली ब्रोमेलैन एंजाइम पाउडर को झूठे से कैसे अलग करें?

बेचने वाली लगभग सभी कंपनियां हैंब्रोमेलैन एंजाइम पाउडरपपैन के साथ मिलाया जाता है। ब्रोमेलैन को 5000जीडीयू/जी तक शुद्ध करना मुश्किल है। लेकिन पपैन को 1000,000GDU/g तक शुद्ध करना बहुत आसान है। यहां तक ​​कि 2000,000 जीडीयू/जी तक। लेकिन ब्रोमेलैन के कार्य पपैन से भिन्न होते हैं। नकली उत्पाद और असली उत्पाद के रंग, गंध, पानी में घुलनशीलता और स्वाद के विपरीत। वे अंतर हैं सही ब्रोमेलैन एंजाइम पाउडर ग्रे, बिना गंध, बेस्वाद और पानी अघुलनशील है।

लेकिन झूठे ब्रोमेलेन की निम्नलिखित विशेषताएं हैं:

● यह हल्का पीला, सुगंधित और हल्का मीठा और पानी में घुलनशील होता है। यह पपैन की विशेषता है।

● इसका उपयोग सूजन कम करने और दर्द दूर करने के लिए किया जाता है। लेकिन पपैन में ये कार्य लगभग नहीं होते हैं।

● इसका उपयोग केवल आहार पूरक के रूप में किया जाता है, खाद्य योज्य के रूप में नहीं, बल्कि वास्तव में फार्मा ग्रेड हो सकता है। लेकिन पपैन का उपयोग केवल मीट टेंडराइज़र पाउडर और सौंदर्य प्रसाधन के रूप में किया जाता है।

हमने एसडीएस-पेज जेल और जिलेटिन डाइजेशन यूनिट एनालिटिकल और एचपीएलसी विधियों के अनुसार ब्रोमेलैन का परीक्षण किया, नकली उत्पाद के लिए एसडीएस-पेज जेल विधि में लक्ष्य अणु कम हैं।

निम्नलिखित एसडीएस पृष्ठ वैद्युतकणसंचलन परिणाम हैं

उपरोक्त धब्बे से पता चलता है कि चित्र में सही जगह पर केवल सही उत्पाद में ही धब्बे होते हैं, लेकिन नकली उत्पाद पर छोटे धब्बे होते हैं, जिसका अर्थ है कि आणविक भार मुश्किल से दिखाई देता है।

ब्रोमेलैन का आणविक भार लगभग 33000 है, लेकिन पपैन का आणविक भार 21000 है। और एचपीएलसी क्रोमैटोग्राम:

आप देखेंगे कि केवल सही अर्क में ब्रोमेलेन का सही आणविक भार होता है और एचपीएलसी द्वारा इसका पता लगाया जा सकता है।

लेकिन अगर हम केवल जिलेटिन डाइजेस्टियन यूनिट एनालिटिकल मेथड (जीडीयू) द्वारा परीक्षण करते हैं, तो अनुलग्नक II देखें। सही और गलत उत्पाद दोनों के समान परिणाम हैं:

अनानास का तना बहुत सस्ता है, और तने से ब्रोमेलेन तक की दर बहुत कम है, निर्माण प्रक्रिया में कुछ प्रदूषण हैं।

लगभग सभी ब्रोमेलैन एंजाइम पाउडर फैक्ट्री खेत के पास हैं। वे ताजे तने का उपयोग करते हैं। लंबी दूरी तक तने को शिप करना असंभव है। कच्चे माल को खेत से एकत्र करते समय जितनी जल्दी हो सके संभाला जाना चाहिए या प्रोटीन क्षरण से बचने के लिए इसे कम टेंपरेचर वातावरण (4-8 डिग्री) में संग्रहित किया जाना चाहिए। वास्तविक जीवन में, अनानास के बहुत से तनों के कारण निर्माता वास्तव में उपरोक्त दो शर्तों में से किसी को भी पूरा नहीं कर सकता है। उचित तरीका समय और प्रोटीन गतिविधि हानि को संभालने के बीच संतुलन है। आम तौर पर, अनानस फसल के मौसम में कच्चे कच्चे माल का निर्माण, और कच्चे कच्चे माल को कम तापमान वातावरण (4-8 डिग्री) में संग्रहित किया जाता है।

हम एसडीएस पृष्ठ वैद्युतकणसंचलन के बारे में कुछ परीक्षण कर रहे हैं, सिद्धांत रूप में हम इसे 10,000 या 20,000 तक बढ़ा सकते हैं। लेकिन यह बहुत महंगा होगा। 5000GDU/g और शायद इसे माल्टो सपोर्ट/माइक्रोएन्कैप्सुलेटेड एक या कुछ और ऑर्गेनिक ग्रेड निष्कर्षण/शुद्धि पर स्थिर करें।

अनुलग्नक I

● विधि 5 एसडीएस पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन (एसडीएस-पेज)

एसडीएस-पेज एक विकृत पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन विधि है। इस विधि में प्रोटीन पृथक्करण का सिद्धांत इस तथ्य पर आधारित है कि अधिकांश प्रोटीन वजन अनुपात में आयनिक सर्फेक्टेंट सोडियम डोडेसिल सल्फेट (एसडीएस) के साथ मिलकर एक जटिल बना सकते हैं।

प्रोटीन अणुओं द्वारा किया गया ऋणात्मक आवेश प्राकृतिक प्रोटीन अणुओं के शुद्ध आवेश से कहीं अधिक होता है, विभिन्न प्रोटीन अणुओं के आवेश प्रभाव को समाप्त करता है और प्रोटीन को उनके आणविक आकार के अनुसार अलग करता है।

इस पद्धति का उपयोग गुणात्मक पहचान, शुद्धता और अशुद्धता नियंत्रण और प्रोटीन के मात्रात्मक निर्धारण के लिए किया जाता है।

1 उपकरण उपकरण

लगातार वोल्टेज या निरंतर वर्तमान बिजली की आपूर्ति, ऊर्ध्वाधर प्लेट वैद्युतकणसंचलन टैंक, और चिपकने वाला मोल्ड।

2. अभिकर्मक

(1) पानी।

(2) पृथक्करण जेल बफर (4x, समाधान A) 1.5mol/L ट्राइहाइड्रोक्सीमिथाइल एमिनोमेथेन हाइड्रोक्लोरिक एसिड बफर। 18.15 ग्राम ट्राइहाइड्रॉक्सीमिथाइल एमिनोमेथेन का वजन करें और इसे उचित मात्रा में पानी के साथ घोलें। हाइड्रोक्लोरिक एसिड के साथ पीएच मान को 88 पर समायोजित करें और पानी के साथ 100 मिलीलीटर तक पतला करें।

(3) 30 प्रतिशत एक्रिलामाइड घोल (बी घोल) में 58.0 एक्रिलामाइड और 20 ग्राम एन, एन '- मेथिलीन बिसाक्रिलामाइड का वजन करें, गर्म पानी में घोलें और 200 मिली तक पतला करें, फिल्टर पेपर के साथ फिल्टर करें (में संग्रहीत) अँधेरा)।

(4) 10 ग्राम सोडियम डोडेसिल सल्फेट को 10 प्रतिशत एसडीएस घोल (सी घोल) में तौलें, पानी में घोलें, और 100 मिली तक पतला करें

(5) टेट्रामिथाइलएथिलीनडायमाइन समाधान (टीईएमईडी, डी समाधान) का व्यावसायीकरण अभिकर्मक।

10 प्रतिशत अमोनियम पर्सल्फ़ेट घोल (ई घोल) 10 ग्राम अमोनियम पर्सल्फ़ेट का वजन करें, पानी में घोलें, और 100 मिली तक पतला करें। उपयोग से पहले इसे तैयार करने या 2 सप्ताह के लिए -20 डिग्री पर अलग से स्टोर करने की सिफारिश की जाती है।

(7) सांद्र रबर बफर (4 ×, एफ समाधान) 0.5mol/L Trihydroxymethylaminomethane हाइड्रोक्लोरिक एसिड बफर, वजन 6.05g Trihydroxymethylaminomethane, घुलने के लिए उचित मात्रा में पानी मिलाएं, हाइड्रोक्लोरिक के साथ pH मान को 6.8 पर समायोजित करें एसिड, और पानी के साथ 100 मिलीलीटर पतला करें।

(8) इलेक्ट्रोड बफर (10 ×) 30 ग्राम ट्राइमिथाइलैमिनोमेथेन, 144 ग्राम ग्लाइसिन और 10 ग्राम सोडियम डोडेसिल सल्फेट का वजन करें, उन्हें पानी में घोलें और लगभग 800 मिली तक पतला करें। हाइड्रोक्लोरिक एसिड के साथ पीएच मान को 8. 1-8.8 पर समायोजित करें, और पानी के साथ 1000 मिलीलीटर तक पतला करें।

(9) नॉन रिड्यूस्ड सैम्पल बफर (4 ×) 303 ग्राम ट्राइमेथिलएमिनोमेथेन, 20 मिलीग्राम ब्रोमोफेनोल ब्लू, और 8.0 ग्राम सोडियम डोडेसिल सल्फेट तौलें, 40 मिली ग्लिसरॉल नापें, पानी में घोलें और लगभग 80 मिली पतला करें। हाइड्रोक्लोरिक एसिड के साथ पीएच को 68 पर समायोजित करें, और पानी के साथ 100 मिलीलीटर तक पतला करें।

(8) इलेक्ट्रोड बफर (10 ×) 30 ग्राम ट्राइमिथाइलैमिनोमेथेन, 144 ग्राम ग्लाइसिन और 10 ग्राम सोडियम डोडेसिल सल्फेट को पानी में घोलें और लगभग 800 मिली तक पतला करें। हाइड्रोक्लोरिक एसिड के साथ डीएच मान को 81-88 पर समायोजित करें, और पानी के साथ 1000 मिलीलीटर तक पतला करें

(9) नॉन रिड्यूस्ड सैंपल बफर (4 ×) 3.03 ग्राम ट्राइमिथाइलएमिनोमेथेन, 20 मिलीग्राम ब्रोमोफिनॉल ब्लू, और 80 ग्राम सोडियम डोडेसिल सल्फेट तौलें, 40 मिली ग्लिसरॉल मापें, पानी में घोलें, और लगभग 80 मिली पतला करें। हाइड्रोक्लोरिक एसिड के साथ पीएच को 6.8 पर समायोजित करें, और पानी के साथ 100 मिलीलीटर तक पतला करें।

(10) कम किया गया परीक्षण पदार्थ बफर (4 ×) 3.03 ग्राम ट्राइमेथिलएमिनोमेथेन, 20 मिलीग्राम ब्रोमोफेनॉल ब्लू, और 80 ग्राम सोडियम डोडेसिल सल्फेट का वजन, 40 मिलीलीटर ग्लिसरॉल को मापें, घोलें और लगभग 80 मिलीलीटर तक पानी से पतला करें, और मिलाएं - 20 एमएल मर्कैप्टोएथेनॉल, हाइड्रोक्लोरिक एसिड के साथ पीएच को 6.8 पर समायोजित करें, पानी के साथ 100 मिलीलीटर (या 3.03 ग्राम ट्राइमिथाइलैमिनोमेथेन, 20 मिलीग्राम ब्रोमोफेनोल ब्लू, 8.0 ग्राम सोडियम डोडेसिल सल्फेट, 40 मिलीलीटर ग्लिसरॉल को मापें, पानी में घोलें और पतला करें) 80 मिली तक, हाइड्रोक्लोरिक एसिड के साथ पीएच को 6.8 पर समायोजित करें, पानी के साथ 100 मिली तक पतला करें, और उपयोग करने से पहले, डाइथियोथ्रेइटोल को 100 मिलीमोल / एल में जोड़ें)।

● अनुलग्नक II

जिलेटिन पाचन इकाई विश्लेषणात्मक विधि (GDU)

ए उद्देश्य: इस प्रक्रिया का उपयोग ब्रोमेलैन एंजाइम पाउडर की प्रोटियोलिटिक गतिविधि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

बी उपकरण:

1. पीएच मीटर

2. 45. 0 डिग्री ± 0.1 डिग्री पर लगातार तापमान जल स्नान

3. विश्लेषणात्मक संतुलन

4. वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क

5. वॉल्यूमेट्रिक पिपेट

6. टाइमर

7. डिजिटल ब्यूरेट (0.1 मिली की सटीकता)

8. धूआं हुड

9. स्वचालित पिपेटर्स

सी. सुरक्षा सावधानियां:

यह परीक्षण धूआं हुड में किया जाना चाहिए।

1. मानक प्रयोगशाला सुरक्षा प्रथाओं का उपयोग करें।

2. फॉर्मलडिहाइड: हर समय एक धूआं हुड तैयार करें और रखें। ज्ञात कार्सिनोजेन और टेराटोजेन।

3. पेरोक्साइड: मजबूत ऑक्सीकारक

डी। अभिकर्मकों और अभिकर्मक की तैयारी:

1. आसुत जल: लगभग 5 0 0 एमएल: 0.1 एन एचसीआई के साथ 4.5 के पीएच में समायोजित करें।

2. जिलेटिन सब्सट्रेट:

एक। 375 मिलीलीटर गर्म पानी में 25 ग्राम जिलेटिन (माइक्रोबायोलॉजी। 1.04070) घोलें, उबाल लें। 45 डिग्री तक ठंडा करें।

बी। पीएच को 0.1 एन एचसीआई के साथ 4.5 पर समायोजित करें और 500 मिलीलीटर पीएच 4.5 आसुत जल को पतला करें।

सी। जिलेटिन सब्सट्रेट को 45 डिग्री पर रखें।

3. बफर समाधान:

एक। 150 एमएल बीकर में 40-50 एमएल पानी में धीरे-धीरे 15 ग्राम NaCl मिलाएं और घुलने के लिए हिलाएं।

बी। 0.570 एमएल एसिटिक एसिड मिलाएं।

सी। 0.2N HCL के साथ pH को 4.5 पर समायोजित करें (मात्रा 100ml से अधिक होगी।)

4. 3 प्रतिशत हाइड्रोजन पेरोक्साइड:

एक। 30 प्रतिशत हाइड्रोजन पेरोक्साइड (स्टॉक समाधान) के 2.5 मिलीलीटर को 25 मिलीलीटर वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में पिपेट करें और पीएच 4.5 आसुत जल के साथ मात्रा में पतला करें

5. 37 प्रतिशत फॉर्मलडिहाइड pH 9.0: a. 0.1 N NaOH (पीएच समायोजन से पहले प्रति नमूना लगभग 20 मिलीलीटर फॉर्मलडिहाइड के लगभग 20 मिलीलीटर) के साथ पीएच 9.0 के लिए फॉर्मलडिहाइड की पर्याप्त मात्रा (100 एमएल) को समायोजित करें।

जिलेटिन पाचन इकाई विश्लेषणात्मक विधि (जीडीयू) - जारी।

6. 0.100 N NaOH: (मानकीकृत खरीदा गया) a. स्टॉक सॉल्यूशन: 0.100 एन पर मानकीकृत

ई। प्रक्रिया:

1. एंजाइम तैयार करना:

एक। एंजाइम तैयारी की गणना

वजन {{0}}/लक्ष्य गतिविधि (लगभग 0.05 ग्राम या 50 मिलीग्राम)

A. एंजाइम को 50 मिली वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में ठीक से तौलें

बी बफर समाधान के 8.3 मिलीलीटर जोड़ें।

बी। कमरे के तापमान पर 30 मिनट तक खड़े रहने दें।

C. पीएच 4.5 आसुत जल का उपयोग करके 50 मिलीलीटर तक पतला करें, एक छोटी सी हलचल बार जोड़ें और अतिरिक्त 10 से 15 मिनट के लिए हिलाएं

2. एंजाइम प्रक्रिया:

एक। जिलेटिन सब्सट्रेट के 25 मिलीलीटर को हलचल सलाखों वाले दो 100 मिलीलीटर बीकर में पिपेट करें और उन्हें 5 मिनट के लिए 45 डिग्री पर पानी के स्नान में रखें, एक परीक्षण समाधान के लिए और दूसरा खाली समाधान के लिए।

बी। जांच समाधान:

1) परीक्षण समाधान के लिए नामित बीकर में 1. 0 एमएल ब्रोमेलैन एंजाइम पाउडर घोल डालें, समय शुरू करें और घूमें।

2) 45 डिग्री पर ठीक 20 ऊष्मायन के बाद, 0.1 मिली 3 प्रतिशत हाइड्रोजन पेरोक्साइड और घुमाएँ।

3) अतिरिक्त 5 मिनट के लिए सेते हैं।

4) बीकर को पानी के स्नान से निकालें और लगातार सरगर्मी के साथ पीएच जांच डालें।

5) 10 सेकंड के बाद पीएच रिकॉर्ड करें (प्रारंभिक पीएच)

6) pH 6 में समायोजित करें। 0 0.1 N NaOH के साथ। (लगभग 2-4 मिली)

*ध्यान दें: पीएच को 6 पर समायोजित करते समय। 0 पीएच 5.8 पर सतर्क रहें; पीएच धीरे-धीरे बढ़ता है और इस बिंदु पर NaOH के सूक्ष्म योग से पीएच में काफी वृद्धि होगी।

7) निरंतर सरगर्मी जारी रखते हुए, 37 प्रतिशत फॉर्मेल्डीहाइड पीएच 9.0 का 10 एमएल मिलाएं।

8) 10 सेकंड और 1 मिनट के बाद pH रिकॉर्ड करें।

9) pH 9 तक अनुमापन करें। 0 0.1 N NaOH के साथ।

10) अनुमापन मात्रा रिकॉर्ड करें।

यह टेस्ट टिटर है, टी.सी.

ब्लैंक सॉल्यूशन: ब्लैंक सॉल्यूशन को टेस्ट सॉल्यूशन के साथ समवर्ती रूप से चलाया जाना चाहिए। परीक्षण समाधान शुरू होने के 12 मिनट बाद रिक्त समाधान निर्धारण शुरू करके इसे पूरा किया जाता है। इससे आपको ब्लैंक सॉल्यूशन के साथ आगे बढ़ने से पहले टेस्ट सॉल्यूशन पर परख पूरी करने का समय मिल जाता है। 1) खाली घोल के लिए निर्धारित बीकर में 0.1 मिली 3 प्रतिशत हाइड्रोजन पेरोक्साइड डालें और घुमाएँ।

2) 45 डिग्री पर ठीक 20 ऊष्मायन के बाद 1.0 मिली ब्रोमेलेन घोल डालें और घुमाएँ।

3) अतिरिक्त 5 मिनट के लिए सेते हैं।

जिलेटिन पाचन इकाई विश्लेषणात्मक पद्धति (जीडीयू) - जारी।

4) बीकर को पानी के स्नान से निकालें और लगातार सरगर्मी के साथ पीएच जांच डालें।

5) 10 सेकंड के बाद पीएच रिकॉर्ड करें (प्रारंभिक पीएच)

6) pH 6 में समायोजित करें। 0 0.1 N NaOH के साथ। (लगभग 2-4 मिली)*ऊपर नोट देखें।

7) निरंतर सरगर्मी जारी रखते हुए, 37 प्रतिशत फॉर्मेल्डीहाइड पीएच 9.0 का 10 एमएल मिलाएं।

8) 10 सेकंड और 1 मिनट के बाद pH रिकॉर्ड करें।

9) pH 9 तक अनुमापन करें। 0 0.1 N NaOH के साथ।

10) अनुमापन मात्रा रिकॉर्ड करें। यह ब्लैंक टिटर है, बी।

एफ गणना:

1. परिभाषा: एक जिलेटिन पाचन इकाई एंजाइम की वह मात्रा है जो पीएच 4.5 या पीएच 5.5 (जीडीयू पीएच 4.5 या पीएच 5.5) पर एक मानक जिलेटिन समाधान से 45 डिग्री पर 20 मिनट पाचन के बाद, 1 मिलीग्राम एमिनो नाइट्रोजन मुक्त करेगी।

GDU/g {{0}} (TB) x 14 x N x 50 Wt (g) कहा पे: T=टेस्ट टिटर (ml 0.1 N NaOH) B=ब्लैंक टिटर (ml 0.1 N NaOH) N=मानकीकृत NaOH की सामान्यता (यानी 0.100) Wt (g)=एंजाइम का प्रारंभिक वजन

जी। परीक्षण पैरामीटर:

1. एंजाइम तैयारियों को लगभग 0.001 g/ml (1 mg/ml) या ब्रोमेलैन एंजाइम पाउडर के लिए लगभग 1-2 GDU/ml की सांद्रता के लिए पतला किया जाता है। विधि सटीकता सुनिश्चित करने के लिए प्रत्येक रन के साथ एक संदर्भ सामग्री की परख की जाती है।

Guanjie GDU परीक्षण पद्धति का उपयोग करके बल्क ब्रोमेलैन पाउडर प्रदान करता है। हमारी उत्पादन प्रक्रिया CGMP मानक कार्यशालाओं के तहत संचालित होती है, दो कारखानों में तीन उत्पादन लाइनों और दो स्वतंत्र प्रयोगशालाओं का उपयोग करती है। हमारे उत्पादों के बारे में किसी भी पूछताछ के लिए, कृपया हमसे संपर्क करेंinfo@gybiotech.com.